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標(biāo)題: 弧菌病藥效實(shí)驗(yàn)——市場(chǎng)治療弧菌感染產(chǎn)品的藥效實(shí)驗(yàn) [打印本頁]

作者: 周zeqin 時(shí)間: 2016-1-4 16:18
標(biāo)題: 弧菌病藥效實(shí)驗(yàn)——市場(chǎng)治療弧菌感染產(chǎn)品的藥效實(shí)驗(yàn)
本帖最后由一片云于 2016-1-11 11:06 編輯

對(duì)蝦的紅體、偷死、肌肉白濁、爛眼爛鰓、熒光、黑斑等癥狀多由弧菌及嗜水氣單胞菌等引起。根據(jù)現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)，抗菌類中藥制劑有38種。本實(shí)驗(yàn)選取水產(chǎn)養(yǎng)殖中常用的大黃末、六味黃龍散、三黃散、根蓮解毒散、七味板藍(lán)根散、大蒜素、蝦倍健、病毒速滅亡、穿梅三黃散、白頭翁口服液、健肝寶、地錦草末12種中藥制劑對(duì)5株常見的海洋致病菌進(jìn)行最低抑菌濃度的測(cè)定，為水產(chǎn)養(yǎng)殖細(xì)菌性疾病的防治提供用藥參考。

藥物準(zhǔn)備：

大黃末（大黃）：每1kg飼料用本品5g

六味黃龍散（龍膽、黃柏、陳皮、厚樸、大黃等）；每1kg飼料用本品4g

三黃散（黃芩、黃柏、大黃、大青葉）；每1kg飼料用本品5g

根蓮解毒散（板藍(lán)根、黃芪、穿心蓮、魚腥草等）；每1kg飼料加本品10g

七味板藍(lán)根散（板藍(lán)根、大黃、黃芪、黃柏、黃蓮等）；每1kg飼料用本品2.5g

大蒜素（含量：25%）；每1kg飼料用本品0.6g

蝦倍健（檵木葉、半邊蓮花、地膽草等8味）；按本品：蝦倍健顆粒為1:3~1:4（土塘1：5）的比例拌勻，于上午喂第一餐料前投喂。

病毒速滅亡（大黃提取液，黃芪多糖等）；每1kg飼料，用本品20ml

穿梅三黃散（黃芩、黃柏、大黃、大青葉、穿心蓮等）；每1kg飼料用本品4g

白頭翁口服液（白頭翁、黃連、黃柏、秦皮）；每1kg飼料用本品3ml

健肝寶（茵陳、大黃、郁金、連翹、柴胡）；每1kg飼料用本品2g

地錦草末（地錦草）；每1kg飼料用本品10g

菌液準(zhǔn)備：

1.用接種環(huán)挑取標(biāo)準(zhǔn)菌株的菌落，接種于10ml的2216E液體培養(yǎng)基中，37℃孵育18h。

2.用2216E液體培養(yǎng)基校正濃度至0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)，約含1×108CFU/ml，經(jīng)肉湯1∶100稀釋。

實(shí)驗(yàn)步驟：

1.藥物配制：分別取上述藥物按包裝標(biāo)示量制備藥液。

藥物按標(biāo)示量配制（g/L）

NZ方 —

大黃末 5

六味黃龍散 4

三黃散 5

根蓮解毒散 10

七味板藍(lán)根散 2.5

大蒜素 0.6

蝦倍健 200

病毒速滅亡 20

穿梅三黃散 4

白頭翁口服液 3

健肝寶 2

地錦草 10

藥物稀釋：取滅菌5mlEP管12管，排成一排，除第1管加入不加水外，其余每管加水1ml，在第1管加入配制好的藥液2ml，然后吸取1ml至第2管，混勻后再吸取1ml至第3管，如此連續(xù)倍比稀釋至第11管，并從第11管中吸取1ml棄去，第12管為不含藥物的對(duì)照。

3.加菌液：將倍比稀釋后不同濃度的藥物溶液及菌液分別加到滅菌的96孔板中，每孔各100μl。置于37℃孵育18h。

結(jié)果觀察：

將孵育后的96孔板取出，無菌操作，每孔取2.5ul涂于2216E瓊脂板，18h后，以抑制細(xì)菌生長的瓊脂板所對(duì)應(yīng)的濃度為最低抑菌濃度。得到以下結(jié)果：

藥物副溶血弧菌溶藻弧菌哈維弧菌創(chuàng)傷弧菌嗜水氣單胞菌

大黃末 - - - - -

六味黃龍散 - - - - -

三黃散 - - - - -

根蓮解毒散 - - - - -

七味板藍(lán)根散 - - - - -

大蒜素 - - - - -

蝦倍健 + + + + +

病毒速滅亡 - - - - -

穿梅三黃散 - - - - -

白頭翁口服液 - - - - -

健肝寶 - - - - -

地錦草末 - - - - -

結(jié)果可知，按標(biāo)示量配制，除“蝦倍健”外其他藥物均無抑菌作用。

分別取上述藥物各16g制備成100ml的濃藥液。此時(shí)各管藥物濃度依次為160、80、40、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156 、0 g/L。

重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)步驟，得到以下實(shí)驗(yàn)結(jié)果（圖）：

中草藥以其安全、副作用小、無耐藥性等獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，逐漸成為研究和開發(fā)的熱點(diǎn)，市面上標(biāo)榜抗菌的中草藥五花八門，但加工粗糙，質(zhì)量良莠不齊，夸大藥效，而養(yǎng)殖戶面對(duì)細(xì)菌感染疾病的爆發(fā)卻無可奈何，抱著嘗試的心態(tài)，盲目用藥，最終用藥無效，對(duì)中藥產(chǎn)品失去信心。然而實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明了“蝦倍健”有別于市面一般的中藥產(chǎn)品，對(duì)常見的致病弧菌及嗜水氣單胞菌均具有良好的抑殺作用。

在實(shí)驗(yàn)隨機(jī)選取的12種養(yǎng)殖過程常用的抗菌中藥的實(shí)驗(yàn)結(jié)果看來，情況令人堪憂，經(jīng)典的抗菌中藥產(chǎn)品——大蒜素、三黃散、七味板藍(lán)根散等最低抑菌濃度均達(dá)到80及以上,甚至超過160mg/ml。而蝦倍健對(duì)各類弧菌的抑菌濃度為0.625mg/ml,比市售中藥類抑菌藥物高出32倍！