| 中國(guó)水產(chǎn)頻道原創(chuàng)報(bào)道， 文/圖中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所王印庚等 2020年春季，新冠疫情正在全國(guó)各地肆虐，對(duì)蝦苗種場(chǎng)“玻璃苗”現(xiàn)象也在沿海各地爆發(fā)。該現(xiàn)象主要在苗種場(chǎng)和標(biāo)苗場(chǎng)發(fā)生，患病蝦苗表現(xiàn)為活力弱、體色暗濁，肝胰腺輪廓模糊、顏色變蒼白呈淡黃色，組織解體呈玻璃樣病變，空腸空胃，隨之呈現(xiàn)急性死亡，養(yǎng)殖業(yè)者稱之為“玻璃苗”。自3月份，該疾病首先在南方苗種場(chǎng)呈現(xiàn)爆發(fā)性趨勢(shì)，并逐步在北方沿海一帶蔓延，導(dǎo)致我國(guó)春季蝦苗供應(yīng)嚴(yán)重不足。同時(shí)，投放的劣質(zhì)蝦苗也導(dǎo)致早期對(duì)蝦養(yǎng)成率明顯下降，這勢(shì)必對(duì)對(duì)蝦產(chǎn)量產(chǎn)生重大影響。4月初至6月，中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所水產(chǎn)動(dòng)物藥理及疾病臨床團(tuán)隊(duì)對(duì)廣東、福建、浙江、山東、河北、天津等地苗種場(chǎng)進(jìn)行樣品收集和致病因綜合分析。 01、流行病學(xué)調(diào)查分析 河北省滄州市坐落于渤海灣腹地，是我國(guó)最大的對(duì)蝦苗種繁育基地之一，現(xiàn)有苗種場(chǎng)240余家，每年育苗能力約300億尾。本團(tuán)隊(duì)對(duì)該地區(qū)多家對(duì)蝦育苗場(chǎng)開(kāi)展了流行病學(xué)調(diào)查分析。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，發(fā)生對(duì)蝦“玻璃苗”現(xiàn)象的苗種場(chǎng)占該地區(qū)的60%以上；大多數(shù)苗種場(chǎng)是采購(gòu)?fù)獾匚r苗（廣東、福建、山東等地）經(jīng)標(biāo)粗后再次銷售。一般標(biāo)苗后2~3d即出現(xiàn)玻璃苗現(xiàn)象，隨即24h內(nèi)蝦苗大部分死亡并排塘處置；甚至部分苗種抵運(yùn)當(dāng)天即出現(xiàn)該現(xiàn)象。依據(jù)患病程度不同，出現(xiàn)明顯玻璃化癥狀的苗種數(shù)量可占個(gè)別苗池總數(shù)的80%。 為進(jìn)一步查明該區(qū)域?qū)ξr“玻璃苗”的主要致病原，選取了滄州市5個(gè)不同區(qū)位的苗種場(chǎng)，取患病和健康對(duì)蝦及其養(yǎng)殖水體進(jìn)行病原檢測(cè)分析，編號(hào)依次為H1、H2、H3、H4、H5（表1）。分別通過(guò)病毒檢測(cè)試劑盒、弧菌和可培養(yǎng)細(xì)菌分離鑒定、石蠟組織切片、超微病理學(xué)觀察等手段進(jìn)行病原及病理學(xué)分析。 典型癥狀： 患病蝦苗表現(xiàn)為活力降低、厭食甚至空腸空胃，蝦體消瘦、暗濁；肝胰腺輪廓模糊、組織解體萎縮、顏色變淺呈淡黃色，甚至肝胰腺區(qū)由正常的飽滿褐色組織變?yōu)榭瞻椎牟ＡЩ癄顟B(tài)，進(jìn)而使得頭胸甲區(qū)域甚至腹部呈現(xiàn)瘦小、蒼白、暗濁狀態(tài)（圖1）。
圖1，對(duì)蝦“玻璃苗”臨床表觀癥狀（空心箭頭為健康蝦苗；實(shí)心箭頭為玻璃苗） 養(yǎng)殖系統(tǒng)細(xì)菌監(jiān)測(cè)： 通過(guò)使用對(duì)蝦病原（IHHNV/EHP）熒光定量檢測(cè)試劑盒（FRK-307）、桃拉綜合癥病毒（TSV）核酸檢測(cè)試劑盒（DHelix）和對(duì)蝦白斑綜合征病毒（WSSV）核酸檢測(cè)試劑盒（DHelix）進(jìn)行常見(jiàn)病毒和微孢子蟲攜帶情況分析，發(fā)現(xiàn)患有典型“玻璃苗”癥狀的蝦苗均未檢測(cè)出上述相關(guān)病原的攜帶。 對(duì)五家育苗場(chǎng)共計(jì)10個(gè)單元的養(yǎng)殖水體及其蝦苗肝胰腺組織中可培養(yǎng)細(xì)菌和弧菌的數(shù)量和種類進(jìn)行檢測(cè)分析，發(fā)現(xiàn)育苗水體的可培養(yǎng)細(xì)菌總量均在103數(shù)量級(jí)，弧菌占比高達(dá)40.2~97.4%（表1）。通過(guò)對(duì)不同場(chǎng)區(qū)患病蝦苗分離得到的優(yōu)勢(shì)菌株進(jìn)行分離鑒定表明，5個(gè)育苗場(chǎng)內(nèi)的優(yōu)勢(shì)菌株均為弧菌，其中新喀里多尼亞弧菌、溶藻弧菌的檢出率最高，且優(yōu)勢(shì)度較大；此外包括副溶血弧菌、歐文氏弧菌、塔氏弧菌、錫那羅州弧菌等不同種類的弧菌也被檢出。 經(jīng)過(guò)初步的人工感染試驗(yàn)表明：新喀里多尼亞弧菌、溶藻弧菌兩種弧菌均對(duì)凡納濱對(duì)蝦的PL5、PL20仔蝦以及幼蝦有很強(qiáng)的致病性，并可出現(xiàn)自然發(fā)病的典型癥狀。藥敏試驗(yàn)分析表明，上述兩種弧菌對(duì)常用的抗生素例如利福平、吡哌酸、鏈霉素、多粘菌素、青霉素、復(fù)方新諾明等有明顯的耐藥性。
02、組織病理特征 石蠟組織切片表明，患病對(duì)蝦肝胰腺萎縮，肝小管上皮細(xì)胞壞死、脫落，肝小管中充斥大量的碎片組織并逐步褐化、黑化。隨著感染程度的加劇，肝小管組織大面積壞死，殘存少量的纖維化細(xì)胞基質(zhì)結(jié)構(gòu)，甚至完全消失，使得肝胰腺組織出現(xiàn)大面積空白區(qū)域，呈現(xiàn)玻璃化組織壞死（圖2a）。 超微組織病理檢測(cè)表明，患病對(duì)蝦肝胰腺和腸道內(nèi)發(fā)現(xiàn)大量細(xì)菌，優(yōu)勢(shì)菌株為桿狀菌且呈弧形。肝小管上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜消融，細(xì)胞與細(xì)胞間界限模糊，細(xì)胞器解體，細(xì)胞核固化，細(xì)胞解體呈碎片并脫落到肝小管內(nèi)；壞死的組織聚集形成大量的電子密度較高的黑化顆粒。腸道絨毛膜上皮細(xì)胞壞死、脫落，僅留下殘存的固有層基質(zhì)，充斥著大量的組織碎片和細(xì)菌顆粒（圖2b）；嚴(yán)重者，腸道絨毛膜組織大面積脫落，導(dǎo)致腸壁變薄。肌原纖維受損、萎縮，導(dǎo)致肌束間間隙增大，部分組織出現(xiàn)崩解現(xiàn)象。經(jīng)過(guò)多種組織的觀察，未發(fā)現(xiàn)病毒粒子的存在。
圖2，對(duì)蝦“玻璃苗”病理特征 a：蝦苗HE染色，肝胰腺大面積壞死，呈現(xiàn)玻璃化病變（實(shí)心箭頭）；b：超微病理觀察，前腸絨毛膜周圍有大量細(xì)菌（空心箭頭） 03、“玻璃苗”的防控策略 通過(guò)對(duì)河北省滄州市五家不同區(qū)位苗種場(chǎng)蝦苗的細(xì)菌分離鑒定分析，表明新喀里多尼亞弧菌（Vibrio neocaledonicus）和溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）檢出率和優(yōu)勢(shì)度最高；同時(shí)，這兩種弧菌均對(duì)凡納濱對(duì)蝦的PL5、PL20仔蝦以及幼蝦有很強(qiáng)的致病性，并可出現(xiàn)自然發(fā)病的典型癥狀；超微病理檢測(cè)也未發(fā)現(xiàn)病毒粒子的存在，由此排除了滄州地區(qū)發(fā)生的對(duì)蝦“玻璃苗”由病毒感染引起的可能性。綜上所述，初步判定對(duì)蝦“玻璃苗”為細(xì)菌性感染引發(fā)的流行性疾病，命名為“蝦苗細(xì)菌性玻化癥”（Shrimp Postlarva Bacterial Vitrified Syndrome，BVS）。 按照細(xì)菌性致病原的疾病特性，以生物安保為指導(dǎo)，提出通過(guò)選購(gòu)SPF親蝦、加強(qiáng)苗種檢疫、減少長(zhǎng)距離苗種運(yùn)輸、做到提前預(yù)防、高效治療等防控理念，以期實(shí)現(xiàn)對(duì)BVS的有效防治，其具體措施如下： （1）選購(gòu)SPF親蝦：通過(guò)培育或選購(gòu)SPF親蝦進(jìn)行苗種繁育，可有效阻斷病原的垂直傳播途徑，降低苗種對(duì)特定病原的攜帶，有助于提高后期標(biāo)苗和養(yǎng)殖過(guò)程中對(duì)蝦的成活率。 （2）加強(qiáng)苗種檢疫力度：結(jié)合區(qū)域內(nèi)對(duì)蝦“玻璃苗”發(fā)生情況和苗種溯源調(diào)查，嚴(yán)格檢測(cè)外來(lái)苗種特定病原及可培養(yǎng)病原菌的攜帶情況，并在苗種入池前進(jìn)行病原消殺工作。 （3）減少長(zhǎng)距離苗種運(yùn)輸：苗種長(zhǎng)距離運(yùn)輸不僅會(huì)加大苗種應(yīng)激反應(yīng)，降低苗種存活率，同時(shí)也加快了病原在南北方、不同區(qū)域間的傳播速度。通過(guò)近距離運(yùn)輸或繁育本地苗種，不僅加強(qiáng)苗種對(duì)本地環(huán)境的適應(yīng)能力，同時(shí)降低折損率和運(yùn)輸成本。 （4）防止病原交叉污染：做好進(jìn)水、排水系統(tǒng)的管理，避免進(jìn)水和排水系統(tǒng)的交叉污染；在水質(zhì)管理上，不僅做到水質(zhì)達(dá)標(biāo)，更重要的是對(duì)有害微生物的嚴(yán)格消殺，防止含有病原菌的外源水或池水在不同養(yǎng)殖區(qū)域的相互串通；同時(shí)，做好養(yǎng)殖器具的消殺和專池專用，以降低病原的交叉性傳染風(fēng)險(xiǎn)。 （5）實(shí)現(xiàn)疾病的高效防治：針對(duì)特定病原研發(fā)專用防治技術(shù)手段，在養(yǎng)殖水體中使用過(guò)硫酸氫鉀、聚六亞甲基胍等控制池水的細(xì)菌總量，并采用專用口服藥物“玻立凈”、“復(fù)合抗菌肽”等進(jìn)行蝦體內(nèi)有害菌的控制。同時(shí)，定期檢測(cè)水體和蝦體中有害菌數(shù)量，評(píng)估蝦體健康狀況和疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，及時(shí)做到對(duì)疾病發(fā)生的預(yù)警預(yù)報(bào)和有效防控。 玻璃苗現(xiàn)象已在全國(guó)沿海普遍發(fā)生并對(duì)產(chǎn)業(yè)造成巨大的創(chuàng)傷。面對(duì)這一產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀，我們亟需從流行病學(xué)角度出發(fā)，全面調(diào)查了解多地苗種產(chǎn)區(qū)的致病原種類是否相同，同時(shí)建立快速檢測(cè)技術(shù)，查明病原的傳播途徑；另外，建立一套既實(shí)用且高效的疾病防控技術(shù)是其重中之重，為徹底解決苗種細(xì)菌性玻化癥提供技術(shù)支撐和參考。 |
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